SYPRO Red

Struktur von SYPRO Red, soweit bekannt. m = 5–6, n = 2–4.

SYPRO Red ist ein Fluoreszenzfarbstoff vom Merocyanin-Typ, der zur Färbung von Proteinen im Zuge einer Proteincharakterisierung verwendet wird, meistens in einer SDS-PAGE.

Eigenschaften

SYPRO Red bindet wie auch sein Analogon SYPRO Orange selektiv an Proteine über 6,5 Kilodalton (auch Glykoproteine) in SDS-Micellen, nicht jedoch an DNA oder Lipopolysaccharide. Die Mutagenität, Reproduktionstoxizität und Karzinogenität von SYPRO Red ist unbekannt. Die Absorptionsmaxima liegen bei λ = 300 nm und 550 nm, die Emission ist bei λ = 630 nm maximal. Die Sensitivität bei SDS-PA-Gelen liegt mit SYPRO Red bei etwa 4–8 ng Protein, also etwas schlechter als bei der Silberfärbung. Aufgrund der Fluoreszenz besitzt die SYPRO Red-Färbung bei einer Mengenabschätzung im Vergleich zur Silberfärbung oder Coomassie einen größeren linearen dynamischen Bereich, d. h. eine bessere Korrelation zwischen der Proteinmenge und der Signalintensität. SYPRO Red eignet sich nicht zur Färbung von Proteinen auf Western Blots, 2D-Gelen oder IEF-Gelen. Im Gegensatz zur Silber- und Coomassie-Färbung werden zur Fixierung vor einer Färbung zwar Essigsäure verwendet, jedoch keine Alkohole wie Methanol oder Ethanol, da SYPRO Red zur Färbung auf die Anwesenheit von SDS angewiesen ist.

Einzelnachweise

  1. 1 2 3 Aleksandr Petrovich Demchenko: Advanced Fluorescence Reporters in Chemistry and Biology III: Applications in Sensing and Imaging Band 3 von Advanced Fluorescence Reporters in Chemistry and Biology. Springer 2011. ISBN 9783642180354. S. 179ff.
  2. 1 2 Patent EP0774122B1: Protein-Färbung mittels Merocyanin Farbstoffe. Angemeldet am 20. Mai 1996, veröffentlicht am 19. August 2009, Anmelder: Molecular Probes Inc, Erfinder: Richard P. Haugland et al.‌
  3. ↑ T. H. Steinberg, L. J. Jones, R. P. Haugland, V. L. Singer: SYPRO orange and SYPRO red protein gel stains: one-step fluorescent staining of denaturing gels for detection of nanogram levels of protein. In: Analytical biochemistry. Band 239, Nummer 2, August 1996, S. 223–237, ISSN 0003-2697. doi:10.1006/abio.1996.0319. PMID 8811914.
  4. ↑ S. Gallagher, D. Chakavarti: Staining proteins in gels. In: Journal of visualized experiments : JoVE. Nummer 17, 2008, ISSN 1940-087X. doi:10.3791/760. PMID 19066521. PMC 3253607 (freier Volltext).
  5. 1 2 3 4 5 6 Datenblatt SYPRO Red Protein Gel Stain bei Sigma-Aldrich, abgerufen am 28. November 2013 (PDF).
  6. ↑ T. H. Steinberg, R. P. Haugland, V. L. Singer: Applications of SYPRO orange and SYPRO red protein gel stains. In: Analytical biochemistry. Band 239, Nummer 2, August 1996, S. 238–245, ISSN 0003-2697. doi:10.1006/abio.1996.0320. PMID 8811917.
  7. 1 2 Molecular Probes / Life Technologies: SYPRO Orange and SYPRO Red Protein Gel Stains. 2003. PDF.