Rukoushuone on seurakunnan tai muun kristillisen yhteisön ylläpitämä rakennus tai muu kokoustila hartaudenharjoitusta varten. Rukoushuone on yleensä kirkkoa vaatimattomampi rakennus.
Suomen evankelisluterilaisen kirkon seurakunnilla voi olla rukoushuoneita kirkollisia toimituksia tai hartauselämää varten. Rukoushuoneet eivät ole sakraalitiloja eli jumalanpalvelustarkoitukseen vihittyjä kirkkoja tai sivukirkkoja eli kappeleita.
Ortodoksisesta rukoushuoneesta käytetään nimitystä kappeli tai tsasouna. Nimitys tsasouna on lähinnä tunteenomainen: tsasouna mielletään useimmiten perinteiseksi puurakenteiseksi, lähinnä karjalaistyyppiseksi rukoushuoneeksi kun kappeli taas on lähinnä kivirakennus. Esimerkiksi Helsingin ortodoksisen seurakunnan hautausmaan vanhempaa pyhäkköä ei sanota tsasounaksi vaan kappeliksi.
Rukoushuoneen vanhentunut nimitys on saarnahuone.