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De formation universitaire en journalisme à l'Université complutense de Madrid, puis comédienne de théâtre madrilène, Ana Rayo interprète en 2018 le rôle de la poétesse Gloria Fuertes qui l'a inspirée dans sa carrière.
Elle joue le rôle de Candela dans la série télévisée Impares.
En 2021, elle interprète le monologue Despierta au Teatro Español de Madrid, dans la salle Margarita Xirgu.
En 2024, elle se fait plus largement connaître au niveau international grâce à la télévision pour sa participation à la série médicale Respira du cinéaste Carlos Montero Castiñeira. Elle y joue le rôle de la chirurgienne féministe Leonor Santapau.