Après des études de droit à Georgetown, dont elle est diplômée en 1986, Barbara Comstock devient avocate. Pendant ses études, elle travaille pour le démocrate Edward Moore Kennedy au Sénat. Elle devient par la suite républicaine et rejoint l'équipe du représentant républicain Frank Wolf au début des années 1990.
En 2014, elle se présente à la Chambre des représentants pour succéder à Frank Wolf dans le 10edistrict de Virginie. Le district, qui s'étend de McLean à Winchester, est une cible des démocrates —n'ayant donné qu'un point d'avance à Mitt Romney en 2012. Comstock remporte la primaire républicaine avec 54% des voix, 26 points devant son plus proche adversaire. Elle est élue représentante avec 56,5% des voix face au démocrate John Foust (40,4%).
Deux ans plus tard, elle est considérée comme l'un des représentants les plus en danger du pays. Elle affronte la démocrate LuAnn Bennett, qui tente de la lier à Donald Trump dans ce district riche et bien éduqué. En octobre, après des propos compromettants de l'homme d'affaires républicain, elle annonce qu'elle ne votera pas pour Trump à l'élection présidentielle et que le parti devrait changer de candidat. Le , elle est réélue avec environ 53% des suffrages.
Les élections de 2018 s'annoncent à nouveau difficiles pour Comstock. Handicapée par l'impopularité de Donald Trump dans sa circonscription, elle est devancée dans tous les sondages réalisés avant les élections. Elle est facilement battue par la démocrate Jennifer Wexton, qui la devance de 12 points.
En , après que les républicains aient voté contre la création d'une commission d'enquête sur l'assaut du Capitole par des partisans de Donald Trump, elle écrit une tribune dans le New York Times pour appeler son parti à prendre ses distances avec l'ancien président.
