Jon Karthaus est né le à Utrecht. Pendant ses années de lycée, il suit plusieurs formations théâtrales, notamment à l’école de théâtre pour jeunes de la Hogeschool voor de Kunsten Utrecht (HKU)(en), l’école supérieure des arts d’Utrecht. Il joue ensuite dans plusieurs productions de la compagnie théâtrale Paardenkathedraal(nl), basée à Utrecht.
Vie privée
Jon Karthaus a été en couple avec l'actrice néerlandaise Carolien Spoor à partir de 2005. Ils se sont mariés en 2016 en Italie et ont eu deux fils: Otis Justus Maurits (né en 2017) et Elias Willem Frederik (né en 2020). En , Spoor a annoncé dans une interview au JANMagazine qu'ils s'étaient séparés,.