Brainbow

Neurony myszy znakowane metodą Brainbow.

Brainbow – metoda obrazowania neuronów wykorzystująca białka fluorescencyjne. Sekwencje genów tych białek są wprowadzane do neuronów metodami inżynierii genetycznej, po czym ulegają ekspresji w sposób losowy, co umożliwia odróżnienie poszczególnych neuronów w preparacie oglądanym pod mikroskopem konfokalnym.

Technika ta została po raz pierwszy opisana w 2007 roku, jej twórcami są Jeff W. Lichtman i Joshua R. Sanes z Harvard Medical School. Jest stosowana w badaniach nad sieciami połączeń nerwowych (konektomami). Nazwa jest połączeniem angielskich słów brain (mózg) oraz rainbow (tęcza).

Opis metody

Brainbow wykorzystuje technikę zlokalizowanej rekombinacji Cre-Lox, która umożliwia ukierunkowane wycinanie fragmentów genów. Wymaga skrzyżowania dwóch linii myszy transgenicznych: jednej, do której wprowadzono sekwencję genu rekombinazy Cre i drugiej, do której wprowadzono sekwencję zawierającą geny trzech białek fluorescencyjnych (świecące na niebiesko, żółto i czerwono) oddzielone od siebie elementami loxP (rozpoznawanymi przez rekombinazę Cre). W uzyskanych w ten sposób myszach dochodzi do losowego wycinania poszczególnych genów białek fluorescencyjnych i syntezy różnych zestawów białek fluorescencyjnych w poszczególnych neuronach.

Neurony myszy znakowane metodą Brainbow; (a) włókna nerwu ruchowego biegnącego do mięśnia ucha, (b) neurony pnia mózgu, (c) neurony w zakręcie zębatym hipokampa.

Przypisy

  1. ↑ SJ. Smith. Circuit reconstruction tools today.. „Curr Opin Neurobiol”. 17 (5), s. 601-8, Oct 2007. DOI: 10.1016/j.conb.2007.11.004. PMID: 18082394.
  2. ↑ J. Livet, TA. Weissman, H. Kang, RW. Draft i inni. Transgenic strategies for combinatorial expression of fluorescent proteins in the nervous system.. „Nature”. 450 (7166), s. 56-62, Nov 2007. DOI: 10.1038/nature06293. PMID: 17972876.
  3. ↑ D. Cai, KB. Cohen, T. Luo, JW. Lichtman i inni. Improved tools for the Brainbow toolbox.. „Nat Methods”. 10 (6), s. 540-7, May 2013. DOI: 10.1038/nmeth.2450. PMID: 23817127.
  4. ↑ JW. Lichtman, J. Livet, JR. Sanes. A technicolour approach to the connectome.. „Nat Rev Neurosci”. 9 (6), s. 417-22, Jun 2008. DOI: 10.1038/nrn2391. PMID: 18446160.

Linki zewnętrzne