Ha esordito come attore nella soap operaPassions, dove dal 1999 al 2004 ha ricoperto il ruolo di Miguel Lopez-Fitzgerald. Nel 2003 partecipa a 2 episodi di Smallville dopodiché raggiunge la popolarità interpretando il giardiniere John Rowland nelle serie televisiva Desperate Housewives. Dopo essersi fatto notare in Desperate Housewives inizia a lavorare per il cinema, nel 2006 è protagonista della commedia Il mio ragazzo è un bastardo, successivamente recita nel film Amore in linea con Shriya e nell'horror Insanitarium.
Nelle versioni in lingua italiana dei suoi lavori, Jesse Metcalfe è stato doppiato da:
Stefano Crescentini in Desperate Housewives, Il mio ragazzo è un bastardo, Fairfield Road, Amore in linea, Chase, Dallas, 2 Broke Girls, Chesapeake Shores, Hard Kill, Sulle ali della speranza