Mazzucchelli começou a trabalhar com quadrinhos na década de 1980 na Marvel Comics, tornando-se artista regular do gibi do Demolidor, junto com o artista Dennis O'Neil. Tempos depois, desenhou o arco "A Queda de Murdock", escrito por Frank Miller. Com Miller, ainda desenhou a revista Batman: Ano Um, da DC Comics, considerada uma das melhores histórias de Batman.
Depois de "Batman: Ano Um", Mazzucchelli passou a focar principalmente em projetos pessoais, como Rubbler Blanket, coeditado por sua esposa Richmond Lewis e publicado em três números. Posteriormente, desenhou e roteirizou em parceria com Paul Karasik e Art Spiegelman, City of Glass, graphic novel adaptação de um conto de Paul Aster. Em 2009, lançou Asterios Polyp, um romance gráfico vencedor do Eisner Award.
Prêmios
Eisner Award 2010 de Melhor letreirização por Asterios Polyp
Eisner Award 2010 de Melhor Melhor escritor/ilustrador por Asterios Polyp
Eisner Award 2010 de Melhor álbum gráfico - inédito por Asterios Polyp
Harvey Award 2010 de Melhor letreirista por Asterios Polyp
Harvey Award 2010 de Melhor graphic novel original por Asterios Polyp
Harvey Award 2010 de Melhor edição ou história por Asterios Polyp
↑Manning, Matthew K.; Dolan, Hannah, ed. (2010). «1980s». DC Comics Year By Year A Visual Chronicle. [S.l.]: Dorling Kindersley. p.227. ISBN978-0-7566-6742-9. Melding Miller's noir sensibilities, realistic characterization, and gritty action with Mazzucchelli's brilliant iconic imagery, "Year One" thrilled readers and critics alike...as well as being one of the influences for the 2005 film Batman Begins.
↑Young, Frank. "Comics Used to be about Telling Stories: David Mazzucchelli Discusses his Transition from Mainstream to Independence", The Comics Journal #152 (August 1992), pp. 114–199.