A partida MLS All-Star de 2000 foi a quinta edição, o jogo envolveu as principais estrelas da Major League Soccer. A equipe da Conferência Leste enfrentou a Conferência Leste no Columbus Crew Stadium, Columbus, em 29 de julho de 2000. A Conferência Leste venceu o jogo por 9-4. O atacante da Conferência Leste Mamadou Diallo foi nomeado como o melhor jogador da partida. Paul Tamberino arbitrou o jogo, que foi acompanhado por 23.495 torcedores.