Isotsyymit eli isoentsyymit ovat entsyymejä, jotka katalysoivat samaa kemiallista reaktiota, mutta joilla on erilainen rakenne. Yleensä isoentsyymit toimivat eri elimistön osissa ja lisäksi ne eroavat toisistaan siten, että niillä on omat KM- ja Vmax-arvonsa. Esimerkkinä isoentsyymeistä on heksokinaasi ja glukokinaasi, jotka katalysoivat glukoosin muuttumista glykolyysissä glukoosi-6-fosfaatiksi. Heksokinaasi toimii lähes kaikissa kudoksissa, mutta glukokinaasi toimii lähinnä maksassa ja haiman beetasoluissa.