고성능 액체 크로마토그래피(영어:high-performance liquid chromatography, HPLC)는 고정상과 시료 및 이동상과의 상호작용으로 혼합물을 단일 성분으로 분리시키는 방법이다.
고성능 액체 크로마토그래피의 정의
HPLC
칼럼에 채우는 고정상의 충진제 그리고 장치의 개선, 개량에 의해, 고속 고성능 분리가 가능해진 크로마토그래피이다. 충진제를 미세하고도 입도가 고른 수형으로 하여 고도의 분리가 가능하기 때문에 흐름에 대한 저항이 높아져 분리할 용액을 고압으로 보낼 필요가 있다. 그래서 '고압 액체크로마토그래피(high pressure liquid chromatography)'라고 한다.
또한 분리가 빠르기 때문에 '고속 액체 크로마토그래피(high speed liquid chromatography)'라고도 한다.
크로마토그래피의 정의
적절한 정지상과 이동상을 사용하여 시료들이 섞여 있는 혼합물을 이동속도 차이를 이용하여 분리하는 방법이다.
고성능 액체 크로마토그래피 시스템의 구성
탈기장치(Degasser)
목적: 이동상 중의 용존 산소, 질소, 기포 등을 제거
방법: He sparging, Vacuum, Ultra-sonication, on-line Degassing
펌프(Pump)
역할: 이동상을 이동상 저장용기에서 끌어내어 시료 주입기로 연속적으로 밀어주는 역할
요건
일정한 유속과 압력을 유지할 것
다양한 용매를 사용할 수 있을 것
Isocratic 및 Gradient
Isocratic: 분석시간 동안 이동상 조성의 변화 없음.
Gradient: 분석시간 동안 이동상 조성이 시간의 흐름에 따라 변함.
시료주입기(injector)
역할: 분석하고자 하는 시료를 용매의 흐름에 실어준다.
종류: 수동(Manual Injection Valve), 자동(Auto Injevtor)
컬럼(column)
구성: 관 모양의 용기에 충전제를 채워서 사용, 분석하고자 하는 시료의 종류에 따라 컬럼의 크기 및 충전제의 종류에 선택하여 사용
고속액체 크로마토그래피(HPLC)는 휘발성이 문제가 되지 않으므로 분자량이 큰 물질의 분석에도 사용될 수 있다. 얼마전까지만 해도 GC가 LC에 비하여 이동상의 차이 때문에 신속한 분석법이었으나 근래에는 HPLC가 분리능력이나 응용범위 면에서 신속정확한 방법으로 각광받고 있다.
GC의 경우 일반적인 사용온도범위(약350°C) 이하에서 기화되지 않는 비휘발성 물질이며 열변성이나 열분해를 쉽게 받는 시료는 일반적으로 직접 분리할 수 없음. 하지만 HPLC는 시료가 상온에서 용해 불가능하여 가온할 필요가 없는 경우를 제외하면 온도와 관계없이 용매가 용해되는 시료는 모두 분리가능.
