X-gal

X-gal
Nomes
Nome IUPAC 5-bromo-4-cloro-3-indoxil-β-D-galactopiranosídeo
X-gal
Identificadores
Número CAS 7240-90-6
PubChem 65181
ChemSpider 58680
MeSH X-gal
ChEBI 75055
SMILES
 
  • Brc3ccc2c(c(O[C@@H]1O[C@@H]([C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O)CO)cn2)c3Cl
InChI
 
  • InChI=1/C14H15BrClNO6/c15-5-1-2-6-9(10(5)16)7(3-17-6)22-14-13(21)12(20)11(19)8(4-18)23-14/h1-3,8,11-14,17-21H,4H2/t8-,11+,12+,13-,14-/m1/s1
    Key:OPIFSICVWOWJMJ-AEOCFKNEBZ
X-gal
Propriedades
Fórmula química C14H15BrClNO6
Massa molar 408.629
Página de dados suplementares
Estrutura e propriedades n, εr, etc.
Dados termodinâmicos Comportamento de fases
Sólido, líquido e gás
Dados espectrais UV, IV, RMN, EM
Exceto onde denotado, os dados referem-se a
materiais sob condições normais de temperatura e pressão.
Referências e avisos gerais sobre esta caixa.
Alerta sobre risco à saúde.

 X-Gal, também conhecida como 5-bromo-4-cloro-3-indoxil-β-D-galactopiranosídeo é um glicosídeo artificial análogo à lactose e um substrato cromógeno para a enzima β-galactosidase.

 Propriedades

A enzima β-galactosidase hidrolisa X-Gal, formando galactose e 5-bromo-4-cloro-3-indoxil. O 5-bromo-4-cloro-3-indoxil]] na presença de oxigênio do ar é oxidado e convertido no corante azul 5,5'-dibromo-4,4'-dicloro-índigo.

Clivagem enzimática do X-Gal leva à formação de 5-bromo-4-cloro-3-indoxil (1). Ao ser exposto ao ar, o composto oxida-se e dimeriza-se, formando o corante azul 5,5'-dibromo-4,4'-dicloro-índigo(2).


Aplicações

Na bioquímica, o X-Gal é utilizado para medição qualitativa da atividade da β-galactosidase benutzt. Para medição quantitativa é utilizado, por sua vez, o substrato o-Nitrofenil-β-D-galactopiranosídeo (ONPG).

Triagem azul-branca após uma transformação (Ágar LB com ampicilina e X-Gal)

Na biologia molecular o X-Gal é utilizado para triagem azul-branca (blue-White screening). Em diversos vetores de clongem, um "sítio de clonagem múltipla" (Multiple Cloning Site) está presente no meio da sequência codificadora do fragmento α (parte N-terminal) da  β-galactosidase. Nesse sítio é possível colocar DNA exógeno de interesse, como fragmentos provenientes de PCR. Com isso, a sequência da β-galactosidase é quebrada somente nas células transformadas com vetor contendo o inserto (DNA exógeno de interesse, que passam a não expressar mais a enzima. Disso segue-se que essas células não poderão mais clivar a  X-Gal, não produzindo produto azul. Nesse processo de transformação, as colônias sem o fragmento exógeno inserido no vetor aparecerão em azul, enquanto as brancas (com o DNA de interesse) aparecerão brancas.

A X-Gal é utilizado normalmente em conjunto com IPTG (um indutor do promotor lac, veja também operon lac), para a triagem das colônias azuis. Ele é utilizado também para aferir a atividade de β-galactosidase como gene repórter. em transfecções de células eucarióticas e para  detecção de β-galactosidase em ensaios de histoquímica.

Outros substratos cromógenos:

Outros substratos fluorógenos:

 Ver também

Referências

  1. ↑ Kiernan JA 2007. Indigogenic substrates for detection and localization of enzymes. Biotechnic & Histochemistry 82(2): 73-103.
  2. ↑ Sandhu, Sardul Singh (2010). Recombinant DNA Technology. [S.l.]: I K International Publishing House. p. 116. ISBN 978-9380578446

Leitura adicional