In biochimica una idrolasi (numero EC 3) è un enzima che catalizza l'idrolisi di un legame chimico. Un enzima in grado di catalizzare la seguente reazione, ad esempio, appartiene alla famiglia delle idrolasi.
Il nome sistematico di ogni idrolasi è composto nel modo seguente: "[Nome substrato] idrolasi". In ogni caso, spesso si usa la terminologia "[Nome substrato]asi", come avviene ad esempio per le nucleasi, che idrolizzano acidi nucleici, o le fosfatasi, che idrolizzano gruppi fosfato.
La classificazione degli enzimi mediante numero EC inserisce le idrolasi nella categoria EC 3. Esistono inoltre 13 ulteriori sottoclassi, costituite in base al tipo di legame idrolizzato dall'enzima.
L'alterazione della sintesi di questa classe chimica di enzimi, solitamente su base genetica, determina una serie di patologie facenti parte dell'eterogeneo gruppo delle malattie da accumulo lisosomiale.
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